為確保Symmetry色譜柱始終保持理想性能，請(qǐng)遵循以下原則：

a. 保護(hù)柱

在進(jìn)樣器和分析柱之間使用填料化學(xué)和顆粒大小都適合的沃特世保護(hù)柱。使用匹配的高性能保護(hù)柱，是保護(hù)主色譜柱而不影響或改變分析分離度的重要措施。保護(hù)柱需要根據(jù)樣品污染情況定期更換。當(dāng)系統(tǒng)背壓穩(wěn)步上升至設(shè)定壓力限值時(shí)，通常表明需要更換保護(hù)柱。突然出現(xiàn)分叉峰也表明需要更換保護(hù)柱。

b. 樣品制備

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會(huì)污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。

2. 為獲得理想峰形和靈敏度，優(yōu)先選用運(yùn)行分析時(shí)要用的流動(dòng)相或比它更弱的流動(dòng)相（有機(jī)改性劑含量更低）來(lái)制備樣品。

3. 如果樣品不是使用流動(dòng)相制備的，務(wù)必確保樣品、溶劑和流動(dòng)相可以混溶，以避免樣品和/或緩沖液產(chǎn)生沉淀。用0.2μm濾膜過(guò)濾樣品，去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)改性劑（如乙腈、甲醇等），請(qǐng)確保濾膜材料不溶于該溶劑。請(qǐng)聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性?；蛘撸梢钥紤]在8,000 rpm下離心樣品溶液20 min，然后將上清液

轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>

c. pH值范圍

Symmetry色譜柱的推薦pH范圍為2~8。表2列出了常用的緩沖液和添加劑。此外，柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖液類型和濃度而有所不同。例如，在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會(huì)縮短色譜柱壽命。

表2：在pH 2~8范圍內(nèi)使用Symmetry色譜柱時(shí)的推薦緩沖液。

d. 溶劑

  為了保持理想的色譜柱性能，請(qǐng)使用優(yōu)質(zhì)的色譜級(jí)溶劑。所有水性緩沖液在使用前都必須過(guò)濾。推薦使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®過(guò)濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會(huì)堵塞色譜柱入口篩板的外表面，這會(huì)導(dǎo)致操作壓力增大，性能變差。使用前，請(qǐng)將所有溶劑徹底脫氣，避免泵和檢測(cè)器中形成氣泡。沃特世還建議使用在線脫氣裝置。運(yùn)行低壓梯度時(shí)，溶劑脫氣尤其重要，因?yàn)樵谔荻冗\(yùn)行過(guò)程中混合水相溶劑與有機(jī)溶劑時(shí)可能形成氣泡。

e. 壓力

  Symmetry色譜柱可承受的壓力上限為6,000 psi（400 bar或40 Mpa），但為了盡可能延長(zhǎng)色譜柱和系統(tǒng)使用壽命，應(yīng)避免壓力超過(guò)4,000-5,000 psi。

f. 溫度

  為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率，Symmetry色譜柱的推薦操作溫度范圍為20℃~45℃。但是，任何高于室溫的溫度都會(huì)對(duì)色譜柱壽命產(chǎn)生不良影響，色譜柱壽命還會(huì)根據(jù)pH和緩沖液條件而有所不同。

IV. 放大/縮小等度方法

  以下公式可在保持線性流速不變的前提下放大或縮小方法，并計(jì)算出新方法的上樣量：

如果色譜柱內(nèi)徑和長(zhǎng)度改變：

F2 = F1(r2/r1)²

或

進(jìn)樣體積1 = 進(jìn)樣體積₂ (r2/r1)²(L2/L1)

其中: r = 色譜柱半徑(mm)

F = 流速(mL/min)

L = 色譜柱長(zhǎng)度(mm)

1 = 原始或參比色譜柱

2 = 新色譜柱

V. 故障排除

  保留時(shí)間、分離度或柱壓變化通常是色譜柱污染所致。請(qǐng)參閱“色譜柱清洗、再生和儲(chǔ)存"有關(guān)色譜柱故障排除問(wèn)題的信息，請(qǐng)參閱最新的waters目錄。